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网  址:www.comatebio.com 
DNA测序服务
1.DNA测序
        在分子生物学研究中,DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法。
Sanger法测序的原理:
        利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物,直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止,终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。
服务内容及周期
服务项目
实验周期
质粒测序
24小时
PCR已纯化测序
24小时
PCR未纯化测序
24小时
菌液测序
24~48小时
免费服务
        测序引物设计和评估
        序列拼接
        DNA序列分析
客户需知
        样品要求:①质粒:100ng/ul,按照10ul/反应提供;最终洗脱时请用超纯水洗脱;
                            ②PCR产物:注明PCR产物长度;3 μl电泳检测为明亮单一条带;PAGE纯化的自带测序引物最小
                                            体积10 μl 3.2 pmol/μl , 10个以上测序样品,引物按1.5ul/反应提供;
                            ③菌液:最小体积200 μl(3 ml新鲜菌液可以直接提质粒做测序);若菌体已加甘油请注明;
                                   除Amp、Kan之外的抗生素需要自行提供,请随同样品一起备齐送达并注明工作浓度。
        引物要求:①引物长度在18~25bp之间;
                            ②四种碱基自由分布;
                            ③GC含量在50%~55%之间;
                            ④不含兼并碱基或特殊修饰的碱基;④无附加酶切位点序列的碱基完全一致。
        我们免费提供常见通用引物进行测序反应,通用引物名称及序列详见本公司网站公布信息。
        样品保存时间:客户的样品及测序引物若无特殊要求我们将保存一个月。如果您对测序结果有任何疑问,请及时联系我们。
提交结果
        测序彩色波形图
        原始测序数据
测序收费细则
        DNA测序是一个鉴定基因序列的检测方法,能否测序成功主要与样品质量及其结构有关,实验过程以及一些人为因素会对测序结果有些影响。
测序是否成功有一定的概率,影响实验成功的因素很多,有些不成功的实验我们能知道原因,也有些我们现在很难知道确切原因。不知道原因的结果,有样品的因素,有实验的因素,也有人为的因素。如果全部由客户或者我们来承担,可能对双方都不公平。为了公平合理,减少争议,尽快解决问题。我们结合各种可能出现的问题,事先制订一个收费规则:
现象描述
可能原因
是否收费
菌培养不好或失败
挑克隆有误,菌污染,订单提供信息有误
质粒抽提不成功
质粒太大或活化方式不好、转化不好、拷贝数低、培养方式不当
测序无信号、信号弱
引物与模板结合不好(引物或模板原因)
鉴定质粒或PCR浓度
建议PCR(20ul) 、质粒(30ul)去离子水溶解
设计引物和序列拼接(大片段测序)
 
可抽提出质粒但测序不成功
引物与模板结合不好(引物或模板原因)
杂 峰
引物不纯,模板不纯
信号中断或衰减
高级结构 GC rich 重复序列
双峰
非单克隆、杂合子、引物特异性差、重复序列、 Poly(A/T/G/C)结构、PCR非特异性扩增
空载体
插入失败,培养过程中片段丢失
客户提供引物导致结果不理想
引物不纯,引物不合适测序
PCR原液纯化后但测序不成功
引物与模板结合不好(引物或模板原因)
收纯化费,不收测序费
 
2.PCR产物扩增及纯化服务
        基于PCR扩增产物后进行测序(本公司主要用3730XL测序仪,Sanger法)。
服务内容
        PCR引物设计
        引物合成
        PCR扩增
        PCR产物纯化
客户需知
        所送实验材料样本必须保证新鲜,请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂。
        由于材料的个体差异及PCR过程中会产生突变等原因,我们不保证获取的基因与参考序列的碱基完全一致。
价格及试验周期
服务项目
收费标准
实验周期
PCR引物设计
免费
1个工作日
引物合成
询价
2~3个工作日
PCR扩增
5元/反应
咨询
PCR产物纯化
5元/反应
咨询
提交结果
        测序彩色波形图
        原始测序数据
3.数据分析服务
        除了我们会分析您测序不理想的原因并提高测序质量外,我们还会用本公司自行研发的软件对您的数据进行序列拼接、序列比对、突变分析等。对于大批量、高通量的数据,我们还会根据您特殊的需求编写相应软件,对所得数据进行处理。
   
Comate common primers.xls  
 
   
Sequence-96w-order
库美生物测序订单
库美生物引物合成订单
Primer-96w-order
д

Order
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