在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法。

        利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物,直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止,终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

服务项目	实验周期
质粒测序	24小时
PCR已纯化测序	24小时
PCR未纯化测序	24小时
菌液测序	24~48小时

        测序引物设计和评估

        序列拼接

        DNA序列分析

        样品要求：①质粒：100ng/ul，按照10ul/反应提供；最终洗脱时请用超纯水洗脱；

                            ②PCR产物：注明PCR产物长度；3 μl电泳检测为明亮单一条带；PAGE纯化的自带测序引物最小
                                            体积10 μl 3.2 pmol/μl , 10个以上测序样品，引物按1.5ul/反应提供；

                            ③菌液：最小体积200 μl（3 ml新鲜菌液可以直接提质粒做测序）；若菌体已加甘油请注明；

                                   除Amp、Kan之外的抗生素需要自行提供，请随同样品一起备齐送达并注明工作浓度。

        引物要求：①引物长度在18~25bp之间；

                            ②四种碱基自由分布；

                            ③GC含量在50%~55%之间；

                            ④不含兼并碱基或特殊修饰的碱基；④无附加酶切位点序列的碱基完全一致。

        我们免费提供常见通用引物进行测序反应，通用引物名称及序列详见本公司网站公布信息。

        样品保存时间：客户的样品及测序引物若无特殊要求我们将保存一个月。如果您对测序结果有任何疑问，请及时联系我们。

        测序彩色波形图

        原始测序数据

        DNA测序是一个鉴定基因序列的检测方法，能否测序成功主要与样品质量及其结构有关,实验过程以及一些人为因素会对测序结果有些影响。

测序是否成功有一定的概率，影响实验成功的因素很多，有些不成功的实验我们能知道原因，也有些我们现在很难知道确切原因。不知道原因的结果，有样品的因素，有实验的因素，也有人为的因素。如果全部由客户或者我们来承担，可能对双方都不公平。为了公平合理，减少争议，尽快解决问题。我们结合各种可能出现的问题，事先制订一个收费规则：

 

        基于PCR扩增产物后进行测序（本公司主要用3730XL测序仪，Sanger法）。

        PCR引物设计

        引物合成

        PCR扩增

        PCR产物纯化

        所送实验材料样本必须保证新鲜，请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂。

        由于材料的个体差异及PCR过程中会产生突变等原因，我们不保证获取的基因与参考序列的碱基完全一致。

服务项目	收费标准	实验周期
PCR引物设计	免费	1个工作日
引物合成	询价	2~3个工作日
PCR扩增	5元/反应	咨询
PCR产物纯化	5元/反应	咨询

        测序彩色波形图

        原始测序数据

        除了我们会分析您测序不理想的原因并提高测序质量外，我们还会用本公司自行研发的软件对您的数据进行序列拼接、序列比对、突变分析等。对于大批量、高通量的数据，我们还会根据您特殊的需求编写相应软件，对所得数据进行处理。