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网  址:www.comatebio.com 
DNA操作服务
        DNA操作对生命科学研究学者来说是一件极为繁冗枯燥的工作。库美生物DNA操作服务拥有成熟的技术和完善的服务流程,能完成任何客户交给我们的DNA操作项目,从而帮您从根本上提高科研工作效率。
1. 质粒提取
        质粒作为低等生物体内的最小遗传单位,是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外,质粒DNA上携带了部分的基因信息,经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。质粒具有分子量小,复制速度快等诸多优点,是分子生物学实验中不可缺少的工具载体。
服务内容
        普通质粒提取
        超纯质粒提取
        无内毒素质粒提取
客户提供信息
        含有目的质粒的菌液样品,样品至少提供1mL。
        质粒的抗性,我们免费提供氨苄青霉素和卡那霉素。
        备注质粒是否为低拷贝质粒。
价格及试验周期
服务项目
提取量(100uL)
收费标准
实验周期
普通质粒提取
100ng/uL
65元/样品
5个工作日
250ng/uL
80元/样品
500ng/uL
120元/样品
1000ng/uL
200元/样品
超纯质粒提取
100ng/uL
100元/样品
6个工作日
250ng/uL
150元/样品
500ng/uL
220元/样品
1000ng/uL
400元/样品
无内毒素质粒提取
100ng/uL
200元/样品
7个工作日
250ng/uL
250元/样品
500ng/uL
320元/样品
1000ng/uL
500元/样品
提交结果
        质粒样品
        电泳照片
        样品质量鉴定报告
        完整实验报告
 
2. 基因组DNA/Total RNA提取
        从新鲜组织、血液、培养细胞、细菌、植物等多种材料中提取基因组DNA和Total RNA,不同种类的材料中提取的基因组DNA和Total RNA量不同,而且差异较大。
服务内容
        动物组织材料基因组DNA/Total RNA提取
        血液基因组DNA/Total RNA提取
        培养细胞基因组DNA/Total RNA提取
        细菌基因组DNA提取
        植物基因组DNA/Total RNA提取
        RNA反转录(可选服务)
服务说明
        细胞、细菌样品需为新鲜培养;动物组织材料、植物组织等样品取样后需采用液氮速冻;血液样品在4℃下保存一周内可用,在-20℃下保存一个月可用。实验样品最好使用干冰运输。
价格及试验周期
1) 基因组DNA提取
材料样品
样品要求
起始量
收量
收费标准
实验周期
动物组织
一般材料
100mg
5~10μg
280元
5个工作日
 
血液
新鲜血液及抗凝剂处理的全血
100μL
1μg左右
细胞
细胞悬液或离心收集后的细胞
1×10­­­­6
10μg左右
细菌
细菌悬液或离心收集后的菌体
1×10­­­­8
1~2μg
植物
一般材料
100mg
5~10μg
450元
2)Total RNA提取
材料样品
样品要求
起始量
收量
收费标准
实验周期
动物组织
一般材料
100mg
100μg左右
280元
5个工作日
 
血液
新鲜血液及抗凝剂处理的全血
100μL
0.1~0.3μg
细胞
细胞悬液或离心收集后的细胞
1×10­­­­6
10μg左右
植物
一般材料
100mg
10μg左右
450元
提交结果
        基因组DNA或Total RNA样品
        电泳照片
        样品质量鉴定报告
        完整实验报告
 
3. 目的基因的获取
        基因工程的主要目的是使优良形状相关的基因聚集在同一生物体中,创造出具有高度应用价值的新物种。在进行表达载体的构建、目的蛋白的表达时,必须从现有生物群中,根据需要分离出的基因,称之为目的基因,即贮备要分离、改造、扩增或表达的基因。我们可以根据您提供的已知参考序列,以基因组DNA或Total RNA为模板,获取您所需要的某个区域的一段基因。
目的基因获取在研究原始材料中基因性状方面的独特优势,是合成基因所不能替代的。
服务内容
        基因组DNA/Total RNA的提取
        以基因组DNA为模板通过PCR扩增得到目的基因
        以Total RNA为模板通过RT-PCR扩增得到目的基因
        目的基因PCR产物的纯化及测序
        目的基因的克隆及测序
        目的基因亚克隆至表达载体中
客户需知
        所送实验材料样本必须保证新鲜,请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂。
        由于材料的个体差异及PCR过程中会产生突变等原因,我们不保证获取的基因与参考序列的碱基完全一致。
价格及试验周期
服务项目
收费标准
实验周期
基因组DNA/Total RNA提取
200~300元
3个工作日
目的基因获取后PCR产物纯化及测序
询价
7个工作日
目的基因获后去后克隆及测序
询价
7~10个工作日
目的基因亚克隆至表达载体中
800~1000元
6个工作日
提交结果
        阳性克隆质粒(50uL,约100ng/uL)
        测序彩色波形图
        保存菌液
        酶切位点
        完整实验报告
 
4.  TA克隆
        利用Taq聚合酶同时具有的末端添A的功能,在每条PCR扩增产物的3’端自动添加一个3'-A突出端。将客户提供的PCR 产物连接到T 载体中,转化,筛选三个以上阳性克隆,测序,获得正确测序结果。判断正确与否的依据是送测序克隆中含有大小相符的插入片段,并可以看到客户的引物序列。库美生物TA克隆系统提供的T载体用于直接高效地连接PCR产物。
服务内容
        PCR产物纯化
        目的基因连接转化
        阳性克隆筛选
        质粒提取及测序
客户提供信息
        未纯化的PCR产物
        PCR产物电泳图片
        引物序列
价格及试验周期
片段长度
收费标准
实验周期
PCR扩增
200元
可选
<500 bp
300元
5个工作日
<1.5 kb
600元
5个工作日
1.5 kb-3 kb
1500元
8个工作日
>3 kb
询价
视具体情况而定
提交结果
        阳性克隆质粒(50uL,约100ng/uL)
        相应的测序结果
        保存菌液
        pMD18-T载体图谱和序列
        TA克隆实验报告
 
5.  cDNA末端的快速扩增(RACE)
        通过杂交、cDNA文库构建等实验方法筛选出一段非全长的cDNA序列后,可以通过RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)实验利用Oligo(dT)对mRNA进行反转录的同时在两头加上通用接头(引物),Conger可利用基因特异性的引物(gene specific primer,GSP)通过PCR反应快度获得目的序列的5’端和3’端,从而获得全长的cDNA。
服务内容
        Total RNA的提取
        3’RACE
        5’RACE
客户需知
        请提供目标基因序列至少200bp,或相似物种GenBank号,如果已知序列较短,建议先进行3'RACE再进行5'RACE以保证试验成功率。 
        新鲜足量的细胞或组织,液氮或干冰低温运输至钟鼎生物,实验样品如需返还,请提前声明。
价格及试验周期
服务项目
基础费用(500bp以内)
超出部分
实验周期
3'RACE技术服务
3000元
2元/bp
15~25个工作日
5'RACE技术服务
4000元
3元/bp
15~25个工作日
Total RNA提取
200~300元
7~10个工作日
上述收费标准是针对正常基因,对于基因含量低于正常的样品,我们会使用特殊的方法,具体情况请与技术人员沟通协商。
提交结果
        PCR产物照片
        测序彩色峰图
        序列碱基报告
        PCR产物或质粒
       保存菌液
       完整实验报告
 
6.  Real Time PCR 服务
        实时定量荧光PCR(Real-time PCR)技术于1996年由美国ABI公司推出,由于该技术不仅实现了从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,具有特异性更强、更能有效的解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法。目前最常用的实时定量方法是染料(SYBR Green I)法和TaqMan探针法两种。实时定量荧光PCR技术已广泛应用于分子生物研究的各个方面,如:DNA定量、RNA定量、SNP分析、基因型分析、RNA变异分析等。
本公司提供两种检测方法:染料法和探针法。
服务内容
        基因组DNA/totalRNA提取
        反转录合成cDNA
        荧光定量检测
        数据分析
客户需知
        新鲜的实验材料或已提取好的RNA,需要的量与其总RNA 抽提的难易程度有关,与客户协商确定;
        目标序列或Genbank 相似基因序列号。
价格及试验周期
服务项目
样品数量
价格(元/样品)
周期
基因组DNA/totalRNA提取
1个样品
300~500元
2~4个工作日
反转录
1个样品
100元
2-4个工作日
SYBR Green 法定量分析
1个样品/
1个基因
基础起价2000元,每个样品100元
5个工作日
Taqman探针法定量
1个基因
基础起价2500元,每个样品100元
5个工作日
标准品制备
1个基因
1200元
8个工作日
提交结果
        基因组DNA或Total RNA样品
        电泳图片
        荧光扩增曲线
        标准曲线
        完整实验报告
 
7.  cDNA文库构建
        cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板,逆转录后与适当的载体连接,转化到受体菌内形成重组DNA克隆群,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中,在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因,因此cDNA文库有组织或细胞特异性。目前本公司可构建的文库包括全长cDNA文库和全长均一化cDNA文库。
文库质量标准
        库容≥1.0×106,普通样品平均插入片段长度≥1.0 kb。
服务内容
        Total RNA提取;
        mRNA纯化;
        反转录合成cDNA第一链;
        PCR扩增合成双链cDNA;
        分级分离双链cDNA,去除小片段DNA;
        双链cDNA的消化与连接。
客户需知
请您提供新鲜的且尽量多的材料
        如果实验材料为动物组织材料,样品质量需大于5g。
        果实验材料为植物样品标本,样品质量需大于20g。
        如果实验材料为各种培养细胞,请您提供5×107以上培养好的细胞。
        您也可以直接提供给我们Total RNA,但要保证RNA没有降解,需要通过电泳等方法进行判断,其纯度要求A260/A280≥1.8,样品总量需大于500ug。
周期与价格
        从提供实验材料起始构建一个样品的cDNA文库,费用为1,2000元。如果客户需要克隆,费用为3000元(5ml甘油保存菌)根据实验难易程度,实验周期一般为4~8周。
提交结果
        质量检验报告
        cDNA与载体的连接产物(20μL)
        完整实验报告
服务说明
        关于实验的具体内容及要求,请与我们联系沟通。 如果您提供给我们Total RNA样品,我们首先需要进行RNA质量及纯度的检测。 实验过程中,我们会随时与您沟通所发生的问题,以便双方共同协商解决。
我们可以对构建好的文库提供后续附加服务,如克隆菌保、PCR扩增、大量测序等,实验费用需另计。
   
Comate common primers.xls  
 
   
Sequence-96w-order
库美生物测序订单
库美生物引物合成订单
Primer-96w-order
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